07 Jul 2021

Salmonella, la importancia del tiempo en las técnicas analíticas de autocontrol

samonella


AUTOR

Joana Hernández Dávila

Diamond V

SALMONELLA, LA IMPORTANCIA DEL TIEMPO EN LAS TÉCNICAS ANALÍTICAS DE AUTOCONTROL DE SALMONELLA: REPERCUSIÓN EN AVICULTURA DE PUESTA PARA LA COMERCIALIZACIÓN DE HUEVO

salmonellaAnualmente, se publican los Programas Nacionales de Control de Salmonella en Avicultura (PNCS), emitidos por el Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación (MAPA). Estos programas pueden incluir modificaciones que aplican a las explotaciones y/o a los laboratorios y que por tanto, todas las partes implicadas, debemos estar pendientes para adaptarnos a las exigencias requeridas.

Aunque durante los últimos años las variaciones aplicadas no han sido muy significativas, este año 2021, comenzó marcado por un cambio trascendental que afecta notablemente a las explotaciones de avicultura de puesta y a la comercialización de huevo para consumo en fresco.

  • Desde el 1 de enero de 2021, tras una detección positiva de Salmonella el laboratorio autorizado, responsable del análisis de autocontrol, debe emitir un primer informe de detección, dentro de las 24 horas desde la obtención del resultado, a la Autoridad competente de la Comunidad Autónoma.
  • Tras esta notificación, los Servicios veterinarios oficiales (SSVVOO) de sanidad animal, paralizarán la comercialización de huevo para consumo en fresco de la manada positiva, hasta que se descarten los serotipos de Salmonella objeto de control (Salmonella Enteritidis, S. Typhimurium, S. Typhimurium monofásica), supervisando la retirada de la venta los SSVVOO de salud pública.

Esta medida, que supone una enorme ventaja a nivel de seguridad alimentaria, puede desencadenar una grave situación para la explotación ganadera, con notables pérdidas económicas, en función de los días que el laboratorio tarde en comunicar el resultado de la tipificación.

Veamos una breve descripción de los métodos de análisis autorizados dentro del PNCS, desde la toma de muestras hasta la obtención del resultado, para entender los tiempos que conllevan, y poder elegir en cada caso, el método más adecuado

  • Según se describe en el Programa Nacional, en las explotaciones de gallinas ponedoras se tomarán heces (producción en jaula) o calzas, (manadas en suelo, camperas u otras producciones alternativas) cada 15 semanas, comenzando a las 24 +/- 2 semanas de edad.
  • Las muestras deben ser entregadas en el laboratorio autorizado en el menor tiempo posible, (se recomienda que no excedan las 24 horas posteriores a la recogida) y siempre acompañadas del documento que recoja todos los datos obligatorios identificativos de la manada muestreada.

El análisis deberá comenzar dentro de las 96 horas posteriores al muestreo, y siguiendo métodos de análisis autorizados por el Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación (MAPA).

¿Qué métodos analíticos podemos utilizar y qué tiempos supone cada uno de ellos?

El método oficial de referencia es la norma EN/ ISO 6579-1 que describe el método horizontal para la detección de Salmonella spp., y consiste en una siembra en placa de agar semisólido, (MSRV) incubado durante 48 +/- 6 horas.

  • Tendremos por tanto el resultado negativo en 3 o 4 días en función del crecimiento obtenido, desde su recepción en el laboratorio.
  • Si se obtienen colonias sospechosas de Salmonella spp., debemos realizar pruebas bioquímicas y microbiológicas de confirmación, alargando el tiempo hasta los 6 días para obtener un resultado positivo definitivo.

Por suerte, disponemos de métodos alternativos reconocidos dentro del PNCS, validados frente al método oficial de conformidad con la Norma EN/ISO 16140-2, que acortan notablemente los días de obtención de resultados.

Entre ellos, podemos destacar un método automatizado que permite obtener el resultado negativo en 28 horas, o en 3 días el resultado positivo, desde el comienzo del análisis.

  • De este modo se reduce el tiempo de análisis frente al método de referencia.
  • Los tiempos indicados se han contabilizado considerando las condiciones óptimas de análisis en el laboratorio, ahora bien, trabajar con micoorganismos vivos puede conllevar complicaciones, que generen ligeras desviaciones en los tiempos de ambos métodos.

A continuación se presentan los esquemas de las técnicas comentadas.

Figura 1. Esquema del método oficial para detección de Salmonella spp., bajo Norma EN/ISO 6579-1.

salmonella

Figura 2. Esquema del método alternativo VIDAS UP para detección de Salmonella spp

Con carácter obligatorio, por especificación del PNCS, ante un resultado positivo de detección de Salmonella spp., debemos identificar el serotipo detectado, o al menos descartar que se trate de un serotipo objeto de control.

Siguiendo el método clásico de tipificación, (esquema de Kaufmann -White) este proceso supone de 3 a 5 días más de análisis, pudiendo incluso alargarse en función de la complejidad de expresión de los antígenos de la Salmonella aislada. Durante este tiempo, recordemos que la comercialización de huevo para consumo en fresco, de la manada positiva, está paralizada

Siendo conscientes de la repercusión que ello conlleva, en nuestro laboratorio hemos implantado un método de diferenciación mediante PCR en Tiempo Real, para descartar que la Salmonella detectada sea Enteritidis, Typhimurium o Thypimurium monofásica, en tan sólo 3 horas una vez confirmado el positivo de Salmonella.

  • Se trata de una técnica analítica de biología molecular, donde el ADN extraído de la Salmonella aislada, se somete a distintos procesos de incubación y amplificación.
  • Posteriormente, personal cualificado del laboratorio, debe realizar la interpretación del resultado, para confirmar si se trata o no, de los serotipos objeto de control.

Esta solución permite emitir, en el mismo día de la confirmación del positivo, un informe de comunicación, que comprende tanto el resultado de la detección positiva, como el de la diferenciación de serotipos. RT-PCR, se convierte por tanto en un método analítico específico, rápido, y de alta fiabilidad que nos permite evitar la paralización de la comercialización de huevo para consumo en fresco en aquellos casos en los, que pese haber detección positiva de Salmonella en la manada, se descarten los serotipos objeto de control

Figura 3. Gráfica de RT-PCR para diferenciación de Salmonella Enteritidis, Salmonella Typhimurium y Salmonella T. Monofásica.

Fuentes bibliográficas: Programa Nacional de Control de Determinados Serotipos de Salmonella en Gallinas Ponedoras de la especie Gallus gallus 2021. Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación, 2021.

Diamond V



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